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NEB/McrBC/M0272S/2,500 units
  • NEB/McrBC/M0272S/2,500 units

NEB/McrBC/M0272S/2,500 units

價(jià)格: ￥3312.00 市場價(jià): 5520.00
貨號(hào): M0272S-2,500units
品牌: NEB
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    • Description:

      RecognitionSite:

      McrBCisanendonucleasewhichcleavesDNAcontainingmethylcytosine*ononeorbothstrands.McrBCwillnotactuponunmethylatedDNA(1).SitesontheDNArecognizedbyMcrBCconsistoftwohalf-sitesoftheform(G/A)mC.Thesehalf-sitescanbeseparatedbyupto3kb,buttheoptimalseparationis55-103basepairs(2,3).McrBCrequiresGTPforcleavage,butinthepresenceofanon-hydrolyzableanalogofGTP,theenzymewillbindtomethylatedDNAspecifically,withoutcleavage(4).
      *5-methylcytosineor5-hydroxymethylcytosineorN4-methylcytosine(5).

      Linearizedplasmid(methylatedorunmethylated),containingoneMcrBCsite,incubatedwithMcrBC.Lane1,unmethylatedDNA;Lane2,methylatedDNA;Lane3,Marker:LamBDaDNABstEIIdigest.
      HumanandDrosophilagenomicDNAincubatedwithMcrBC.60-90%ofCpGsinvertebrateDNAareestimatedtobemethylated(6)whilemethylatedCpGsareextremelyrareinDrosophilaDNA(7).Lane1,HumanDNA;Lane2,HumanDNAincubatedwithMcrBC;Lane3,DrosophilaDNA;Lane4,DrosophilaDNAincubatedwithMcrBC;Lane4,Marker:LambdaDNABstEIIdigest.

      ProductSource

      ThetwocomponentproteinsarepurifiedseparatelyfromE.coliK-12strainscontainingplasmidsencodingMcrBandMcrC(1).

      ReagentsSupplied

      Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:

      Storeat(°C)Concentration
      NEBuffer™2-2010X
      PlasmidDNAforMcrBCLinearizedmethylated(20μl)100μg/ml
      GTP-20100X
      PurifiedBSA-2010X

      Notes:

      McrBCmakesonecutbetweeneachpairofhalf-sites,cuttingclosetoonehalf-siteortheother,butcleavagepositionsaredistributedoverseveralbasepairsapproximately30basepairsfromthemethylatedbase(2).Therefore,theenzymedoesnotproducedefinedDNAendsuponcleavage.Also,whenmultipleMcrBChalf-sitesarepresentinDNA(asisthecasewithcytosine-methylatedgenomicDNA)theflexIBLenatureoftherecognitionsequenceresultsinanoverlapofsites,andsoasmearedratherthanasharpbandingpatternisproduced.McrBCcleavageofthesupplied4.3kblinear,methylatedcontrolplasmidDNAproducesseveralfragmentsbetweenapproximately700bpand2.3kbinsize.GTPismorelABIlethanothernucleotides.Werecommendaliquotingthe100mMsolutionsuppliedandthawinganddilutingasnecessary.
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